检测样品
酶活性检测的样品通常来源于不同的生物体,如动物组织、植物提取物、微生物培养液等。常见的检测样品包括:
- 动物样品:如血清、肝脏、肌肉组织等。
- 植物样品:如叶片、根部、果实提取液。
- 微生物样品:如细菌、酵母、真菌等的培养液。
- 合成样品:一些重组酶或合成的酶产品。
不同的样品需要根据其物质特性来进行适当的预处理和提取,以确保检测结果的准确性和可重复性。
检测项目
酶活性检测主要集中在以下几个项目:
- 酶反应速率:酶催化反应的速率通常是酶活性的直接反映。反应速率的变化与酶浓度、底物浓度以及反应环境(如温度、pH值等)密切相关。
- 反应产物的浓度:通过测定反应产物的浓度,可以间接反映酶的活性水平。
- 酶的最适反应条件:包括温度、pH、盐浓度等,能为进一步的应用研究提供指导。
- 酶的抑制/激活效应:通过分析酶活性在不同抑制剂或激活剂的作用下的变化,研究酶的调控机制。
这些检测项目能够全面评估酶的催化能力、稳定性以及在特定条件下的活性变化。
检测仪器
酶活性检测通常依赖于高精度仪器和分析设备。以下是常用的几种检测仪器:
- 分光光度计:用于测定反应体系中产物的浓度变化,进而计算酶活性。常见的反应体系有NADH/NAD+、ATP/ADP等。
- 荧光光谱仪:用于检测具有荧光特性的反应产物或酶标记物,能够提供更加灵敏的检测结果。
- 高效液相色谱(HPLC):用于分离和定量酶反应的产物,尤其适用于复杂反应体系。
- 实时PCR仪:适用于通过基因表达水平间接评估酶活性。
不同的检测方法需要结合样品类型和实验设计选择合适的仪器,以提高检测的灵敏度和准确性。
检测方法
酶活性检测方法主要有以下几种:
- 比色法:通过测定反应体系的颜色变化来评估酶活性。常见的比色法有使用酚类、醛类或还原性物质进行反应。
- 荧光法:利用酶反应产物的荧光特性,通过荧光信号强度来定量酶活性。
- 放射性同位素法:在一些特殊实验中,使用放射性同位素标记底物,测定反应产物的放射性来评估酶活性。
- 气相色谱法(GC):用于检测气体产物,如酶催化的气体生成反应。
- 电化学法:通过电流或电位变化来监测酶反应,适用于一些需要氧化还原反应的酶。
选择合适的检测方法需要考虑实验的具体要求,如灵敏度、准确度、样品特性等。
检测标准(部分)
《 T/NAIA 0279-2024 土壤中蛋白酶活性的测定 》标准简介
- 标准名称:土壤中蛋白酶活性的测定
- 标准号:T/NAIA 0279-2024
- 中国标准分类号:A019
- 发布日期:2024-01-25
- 国际标准分类号:65.020.01
- 实施日期:2024-01-31
- 团体名称:宁夏化学分析测试协会
- 标准分类:农业A 农、林、牧、渔业
- 内容简介:
本文件规定了土壤中蛋白酶活性的测定方法。本文件适用于土壤中蛋白酶活性的测定。
《 T/CSTM 01090-2022 乙酰胆碱酯酶 活性检测 分光光度法 》标准简介
- 标准名称:乙酰胆碱酯酶 活性检测 分光光度法
- 标准号:T/CSTM 01090-2022
- 中国标准分类号:G66/C266
- 发布日期:2022-10-28
- 国际标准分类号:71.040.30
- 实施日期:2023-01-28
- 团体名称:中关村材料试验技术联盟
- 标准分类:G 交通运输、仓储和邮政业化工技术
- 内容简介:
本文件规定了用分光光度法测定乙酰胆碱酯酶活性的方法本文件适用于有机磷与氨基甲酸酯类农药残留检测专用试剂中乙酰胆碱酯酶活性的测定,本方法定量限为0.01μmol/(mL·min),测量范围为0.01μmol/(mL·min)~0.13μmol/(mL·min)本文件规定了用分光光度法测定乙酰胆碱酯酶活性的方法
本文件适用于有机磷与氨基甲酸酯类农药残留检测专用试剂中乙酰胆碱酯酶活性的测定,本方法定量限为0.01μmol/(mL·min),测量范围为0.01μmol/(mL·min)~0.13μmol/(mL·min)
《 T/CAIA SHO19-2022 乙酰胆碱酯酶 活性检测 分光光度法 》标准简介
- 标准名称:乙酰胆碱酯酶 活性检测 分光光度法
- 标准号:T/CAIA SHO19-2022
- 中国标准分类号:M733
- 发布日期:2022-10-25
- 国际标准分类号:67.050
- 实施日期:2022-12-01
- 团体名称:中国分析测试协会
- 标准分类:M 科学研究和技术服务业食品技术
- 内容简介:
乙酰胆碱酯酶能水解碘化硫代乙酰胆碱生成硫代胆碱和乙酸
硫代胆碱与巯基显色剂5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)反应生成黄色化合物5-巯基-2-硝基苯甲酸(TNB),TNB在波长412nm处有特征性光吸收,测定其吸光度值;根据还原型谷胱甘肽制备标准溶液与DTNB反应,所绘制谷胱甘肽的量与吸光度关系的标准曲线,计算出乙酰胆碱酯酶的酶活性值
《 T/CIFST 008-2022 乳中乳过氧化物酶活性的测定 比色法 》标准简介
- 标准名称:乳中乳过氧化物酶活性的测定 比色法
- 标准号:T/CIFST 008-2022
- 中国标准分类号:C139
- 发布日期:2022-04-22
- 国际标准分类号:67.040
- 实施日期:2022-04-22
- 团体名称:中国食品科学技术学会
- 标准分类:C 制造业食品技术
- 内容简介:
本文件规定了乳中乳过氧化物酶活性测定的比色法
本文件适用于生乳、巴氏杀菌乳中乳过氧化物酶活性的测定
《 T/SHRH 015-2018 化妆品-酪氨酸酶活性抑制实验方法 》标准简介
- 标准名称:化妆品-酪氨酸酶活性抑制实验方法
- 标准号:T/SHRH 015-2018
- 中国标准分类号:Y42/C268
- 发布日期:2018-12-01
- 国际标准分类号:71.100.70
- 实施日期:2018-12-30
- 团体名称:上海日用化学品行业协会
- 标准分类:C 制造业化工技术
- 内容简介:
1.范围2.原理3.仪器4.试剂5实验方法6.结果计算7.试验有效性验证8.结果报告
《 T/GDCA 006-2021 化妆品原料对酪氨酸酶活性抑制试验方法 (体外法) 》标准简介
- 标准名称:化妆品原料对酪氨酸酶活性抑制试验方法 (体外法)
- 标准号:T/GDCA 006-2021
- 中国标准分类号:C268
- 发布日期:2021-10-29
- 国际标准分类号:71.100.70
- 实施日期:2021-11-30
- 团体名称:广东省化妆品学会
- 标准分类:C 制造业化工技术
- 内容简介:
本文件规定了一种体外酪氨酸酶活性抑制试验方法本文件适用于通过抑制酪氨酸酶活性而达到美白效果的化妆品水溶性原料的功效测试1.实验方法除非另有说明,本文件所提到的受试样品的浓度均指其配制时的浓度
1.1受试物处理阳性对照曲酸用PBS缓冲液稀释成:0.080g/L、0.040g/L、0.020g/L、0.010g/L、0.008g/L、0.005g/L、0.002g/L、0.001g/L系列质量浓度梯度溶液
受试物处理:受试物用PBS缓冲液梯度稀释成5个以上合适质量浓度的样品溶液
1.2试验分组在96孔酶标板中设置溶剂本底孔(Ta)、溶剂反应孔(Tb)、样品本底孔(Tc)、样品反应孔(Td)
其中,Ta组为溶剂本底组,不加底物L-酪氨酸溶液、不加样品溶液;Tb组为溶剂反应组,加底物L-酪氨酸溶液但不加样品溶液;Tc组为样品本底组,不加底物L-酪氨酸溶液、加样品溶液;Td组为样品反应组,既加底物L-酪氨酸溶液又加样品溶液
每组做三个复孔
1.3试验步骤参照表1试剂添加量,在各孔依次加入L-酪氨酸溶液、样品溶液/溶剂、PBS缓冲液,充分混匀,置于37℃恒温环境下孵育10min后依次在各孔加入20μL的酪氨酸酶溶液,37℃混匀反应5min±5s后即刻放入酶标仪,在475nm波长处进行测定
注:各孔从加入酪氨酸酶溶液到测定吸光度,保持时间一致(5min±5s)
2.结果计算2.1酪氨酸酶活性抑制率2.2半数抑制浓度(IC50值)以受试样品的浓度为横坐标,其对应的酪氨酸酶抑制率为纵坐标,绘制曲线图,拟合得到回归方程(R2≥0.9)
根据回归方程,计算酪氨酸酶抑制率为50%时对应的样品浓度,即为该受试样品的IC50值,同时计算其95%置信区间
2.3曲酸当量值3.试验有效性验证每批次实验都需要加入阳性对照的测试,阳性对照曲酸的IC50应在0.005g/L~0.03g/L,则认为试验系统有效
各组平行孔间的抑制率间的标准差(StandardDeviation,SD)值需≤15%,则认为试验平行性有效
加入酪氨酸酶溶液,37℃混匀反应5min±5s后即刻放入酶标仪,在475nm波长处进行测定:±5s时间对测试结果IC50的影响,标准差SD值≤3%
4.结果判定样品在某一受试浓度下的酪氨酸酶抑制率应表述为:抑制率平均值±抑制率间的标准差(SD)
进行不同样品的酪氨酸酶抑制能力比较,在同一受试浓度下,抑制率越大代表该样品的酪氨酸酶抑制能力越强
进行不同样品的酪氨酸酶抑制能力比较,IC50值越小代表该样品的酪氨酸酶抑制能力越强
进行不同样品的酪氨酸酶抑制能力比较,曲酸当量值越小代表该样品的酪氨酸酶抑制能力越强
《 DB37/T 577-2005 饲料添加剂6位点植酸酶活性的测定 分光光度法 》标准简介
- 标准名称:饲料添加剂6位点植酸酶活性的测定 分光光度法
- 标准号:DB37/T 577-2005
- 中国标准分类号:B20
- 发布日期:2006-01-23
- 国际标准分类号:65.120
- 实施日期:2006-03-01
- 技术归口:
- 代替标准:
- 主管部门:山东省质量技术监督局
- 标准分类:农业农、林、牧、渔业山东省饲料
- 内容简介:
地方标准《饲料添加剂6位点植酸酶活性的测定 分光光度法》,主管部门为山东省质量技术监督局。
《 DB41/T 1615-2018 食用菌纤维素酶、木聚糖酶、漆酶、蛋白酶活性检测技术规程 》标准简介
- 标准名称:食用菌纤维素酶、木聚糖酶、漆酶、蛋白酶活性检测技术规程
- 标准号:DB41/T 1615-2018
- 中国标准分类号:B05
- 发布日期:2018-06-19
- 国际标准分类号:65.020.20
- 实施日期:2018-09-19
- 技术归口:
- 代替标准:
- 主管部门:河南省质量技术监督局
- 标准分类:农业农、林、牧、渔业河南省
- 内容简介:
地方标准《食用菌纤维素酶、木聚糖酶、漆酶、蛋白酶活性检测技术规程》,主管部门为河南省质量技术监督局。
《 DB34/T 1729-2012 窖泥中脱氢酶活性的分析方法 》标准简介
- 标准名称:窖泥中脱氢酶活性的分析方法
- 标准号:DB34/T 1729-2012
- 中国标准分类号:X00
- 发布日期:2012-11-06
- 国际标准分类号:67.040
- 实施日期:2012-12-06
- 技术归口:安徽省浓香型白酒标准化技术委员会
- 代替标准:
- 主管部门:安徽省质量技术监督局
- 标准分类:食品技术制造业安徽省食品综合
- 内容简介:
地方标准《窖泥中脱氢酶活性的分析方法》由安徽省浓香型白酒标准化技术委员会归口上报,主管部门为安徽省质量技术监督局。本标准规定了窖泥中脱氢酶活性的分析方法。本标准适用于浓香型白酒窖泥中脱氢酶活性的分析。
《 NY/T 4306-2023 木瓜、菠萝蛋白酶活性的测定 紫外分光光度法 》标准简介
- 标准名称:木瓜、菠萝蛋白酶活性的测定 紫外分光光度法
- 标准号:NY/T 4306-2023
- 中国标准分类号:B30
- 发布日期:2023-02-17
- 国际标准分类号:67.080
- 实施日期:2023-06-01
- 技术归口:
- 代替标准:
- 主管部门:农业农村部
- 标准分类:农业食品技术蔬菜及其制品水果蔬菜及其制品综合农、林、牧、渔业NY 农业
- 内容简介:
行业标准《木瓜、菠萝蛋白酶活性的测定 紫外分光光度法》,主管部门为农业农村部。本文件规定了木瓜、菠萝蛋白酶活性测定的紫外分光光度法。本文件适用于木瓜、菠萝蛋白酶活性的测定。本文件规定了木瓜、菠萝蛋白酶活性测定的紫外分光光度法。本文件适用于木瓜、菠萝蛋白酶活性的测定。
《 SN/T 0800.4-2015 出口粮食、饲料检验 第4部分:尿素酶活性测定方法 》标准简介
- 标准名称:出口粮食、饲料检验 第4部分:尿素酶活性测定方法
- 标准号:SN/T 0800.4-2015
- 中国标准分类号:B20
- 发布日期:2015-12-04
- 国际标准分类号:67.050
- 实施日期:2016-07-01
- 技术归口:国家认证认可监督管理委员会
- 代替标准:代替SN/T 0800.4-1999
- 主管部门:国家质量监督检验检疫总局
- 标准分类:食品技术食品试验和分析的一般方法制造业SN 出入境检验检疫
- 内容简介:
行业标准《出口粮食、饲料检验 第4部分:尿素酶活性测定方法》由国家认证认可监督管理委员会归口上报,主管部门为国家质量监督检验检疫总局。SN/T0800的本部分规定了尿素酶活性的测定方法。本部分适用于出口粮食、饲料用大豆粕、饼、粉等大豆制品中尿素酶活性的测定。
《 WS/T 222-2002 临床酶活性浓度测定方法总则 》标准简介
- 标准名称:临床酶活性浓度测定方法总则
- 标准号:WS/T 222-2002
- 中国标准分类号:C50
- 发布日期:2002-04-20
- 国际标准分类号:13.020
- 实施日期:2002-07-01
- 技术归口:
- 代替标准:
- 主管部门:卫生部
- 标准分类:环保、保健和安全医药卫生技术医学科学和保健装置综合WS 卫生
- 内容简介:
行业标准《临床酶活性浓度测定方法总则》,主管部门为卫生部。本标准规定了临床酶活性浓度测定方法总则。本标准适用于临床与基础医学实验室进行酶活性浓度的测定,也可作为与酶活性浓度检验有关的仪器和试剂生产企业、有关评价单位及质量管理部门的标准。
《 NY/T 3799-2020 生乳及其制品中碱性磷酸酶活性的测定 发光法 》标准简介
- 标准名称:生乳及其制品中碱性磷酸酶活性的测定 发光法
- 标准号:NY/T 3799-2020
- 中国标准分类号:X04
- 发布日期:2020-11-12
- 国际标准分类号:67.050
- 实施日期:2021-04-01
- 技术归口:全国畜牧业标准化技术委员会(SAC/TC274)
- 代替标准:
- 主管部门:农业农村部
- 标准分类:食品技术食品试验和分析的一般方法农、林、牧、渔业NY 农业
- 内容简介:
行业标准《生乳及其制品中碱性磷酸酶活性的测定 发光法》,主管部门为农业农村部。本标准规定了生乳及其制品中碱性磷酸酶活性测定的发光法。本标准适用于牛、羊、水牛、牦牛等不同奶畜生乳及其制品(巴氏杀菌乳、调制乳、奶油等)中碱性磷酸酶的测定。本标准的检出限为20mU/L,定量限为60mU/L。
《 WST 419-2013 参考物质中酶活性浓度的赋值 》标准简介
- 标准名称:参考物质中酶活性浓度的赋值
- 标准号:WST 419-2013
- 中国标准分类号:C50
- 发布日期:2013-06-03
- 国际标准分类号:11.020
- 实施日期:2013-12-01
- 技术归口:卫生部临床检验标准正规委员会
- 代替标准:
- 主管部门:卫生健康委员会
- 标准分类:医药卫生技术卫生医学科学和保健装置综合WS 卫生卫生和社会工作
- 内容简介:
行业标准《参考物质中酶活性浓度的赋值》由卫生部临床检验标准正规委员会归口上报,主管部门为卫生健康委员会
《 SN/T 0800.4-1999 进出口粮食饲料 尿素酶活性检验方法 》标准简介
- 标准名称:进出口粮食饲料 尿素酶活性检验方法
- 标准号:SN/T 0800.4-1999
- 中国标准分类号:X11
- 发布日期:1999-12-01
- 国际标准分类号:67.050
- 实施日期:2000-05-01
- 技术归口:中华人民共和国国家出入境检验检疫局
- 代替标准:代替ZB X14024-1990被SN/T 0800.4-2015代替
- 主管部门:国家出入境检验检疫局
- 标准分类:食品技术食品试验和分析的一般方法制造业SN 出入境检验检疫
- 内容简介:
行业标准《进出口粮食饲料 尿素酶活性检验方法》由国家认证认可监督管理委员会归口上报,主管部门为国家出入境检验检疫局。
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结语
酶活性检测不仅是基础研究中不可或缺的工具,也是临床诊断、药物开发、食品安全等应用领域的重要手段。随着检测技术的不断进步,我们能够更加精确和高效地评估酶的催化特性,为各行各业提供重要的技术支持。未来,酶活性检测将更加多元化,发展方向也将向着高通量、自动化和实时检测等方面推进,从而进一步推动生物学研究和应用的进步。
结语
以上是关于酶活性检测:如何科学准确地评估酶的活性及应用的介绍,如有其它问题请 联系在线工程师 。