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总黄酮检测：科学严谨的分析与方法详解
概括
**总黄酮**是一类广泛存在于植物中的生物活性物质，具有多种生理功能。在食品、医药及化妆品等领域，对总黄酮的含量检测至关重要，以确保产品质量与安全性。本文将详细介绍总黄酮的检测样品、检测项目、检测仪器及检测方法，帮助您全面了解总黄酮的科学检测流程。
检测样品
总黄酮检测适用于多种样品类型，常见的包括：
- **植物提取物**（如银杏叶、黄芩、槐米等）
- **中药材及中成药**（如黄芪、人参、丹参等）
- **食品及保健品**（如蜂蜜、茶叶、植物饮料等）
- **化妆品**（如植物精华护肤品等）
不同样品的基质成分各异，因此检测时需针对性选择合适的分析方法。
检测项目
总黄酮检测的主要项目包括：
- **总黄酮含量测定**：评估样品中黄酮类物质的总体浓度。
- **主要单体黄酮测定**：检测具体黄酮成分，如槲皮素、芦丁等。
- **杂质及其他成分分析**：检查是否含有非目标黄酮类物质或其他影响检测的成分。
- **稳定性检测**：分析黄酮在不同储存条件下的变化情况。
这些检测项目能够为产品研发、质量控制及市场监管提供重要数据支持。
检测仪器
总黄酮的检测依赖先进的分析仪器，常用设备包括：
- **紫外-可见分光光度计（UV-Vis）**：用于比色法测定总黄酮含量，操作简便，适用于大多数样品。
- **高效液相色谱（HPLC）**：能够高效分离并定量测定特定黄酮单体，灵敏度高，适合复杂样品分析。
- **气相色谱-质谱联用（GC-MS）**：适用于挥发性黄酮化合物的检测，能够提供精确的定性和定量分析。
- **超高效液相色谱（UPLC）**：分离效果更佳，分析速度快，适用于精细化检测需求。
不同仪器各有优势，检测时可根据具体需求选择合适设备。
检测方法
根据检测目标的不同，总黄酮的测定方法主要包括：
- **铝离子比色法**：利用黄酮与铝离子形成的络合物比色测定，总黄酮含量可通过紫外-可见分光光度计测定，方法快速、经济。
- **HPLC法**：采用适当的流动相和检测波长，通过高效液相色谱分离和定量，适用于特定黄酮单体的测定。
- **UPLC-MS法**：利用超高效液相色谱-质谱联用技术，提供更高的灵敏度和准确性，可对复杂样品进行精确分析。
不同检测方法适用于不同应用场景，应根据具体需求选择合适的方法。
检测标准（部分）
《 T/ZMX 004-2020 张家界莓茶 总黄酮的测定 》标准简介
- 标准名称：张家界莓茶 总黄酮的测定
- 标准号：T/ZMX 004-2020
- 中国标准分类号：X04/M745
- 发布日期：2020-12-20
- 国际标准分类号：67.050
- 实施日期：2021-01-01
- 团体名称：张家界市莓茶协会
- 标准分类：M 科学研究和技术服务业食品技术
- 内容简介：
本文件规定了张家界莓茶总黄酮检测的原理、仪器和用具、试剂与溶液、操作方法及结果计算的方法本文件适用于张家界市莓茶协会成员生产的莓茶的总黄酮测定3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件
3.1张家界莓茶ZhangjiajieAmpelopsisgrossedentata特指生长于张家界行政区域内，经人工栽培种植的显齿蛇葡萄植物，采摘其幼嫩茎叶或成熟绿叶为原料，采用摊青、杀青、揉捻、析晶、干燥等工艺加工而成的代用茶饮品
3.2总黄酮Totalflavonoids指一类具有苯并芘喃环结构的黄酮类化合物的总称，广泛存在于植物界，最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄(醇)、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等
显齿蛇葡萄叶中的黄酮类化合物主要为二氢杨梅素
4 原理黄酮类化合物中的3-羟基、4-羟基或5-羟基、4-羰基或邻二位酚羟基，可与铝盐进行络合反应，在碱性液体中生成红色络合物，在一定的浓度范围内，其浓度与吸光度符合比耳定律
显齿蛇葡萄叶中的主要活性成分为黄酮类化合物中的二氢杨梅素,最大紫外吸收波长为291nm，可通过制作标准工作曲线和测定样品的吸光度，计算样品中总黄酮含量
5 仪器和用具5.1仪器紫外可见分光光度计（波长范围190nm～900nm，日本岛津公司）、天平（感量0.001g，梅特勒-托利多仪器上海有限公司）、水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）、粉碎机（浙江屹立工贸有限公司）
5.2用具容量瓶（10mL,25mL,50mL和100mL）、10mm比色皿
6 试剂与溶液6.1除非另有说明，本文件所用的试剂均为分析纯（AR），水为蒸馏水
6.25%AlCl3溶液：准确称取5.0g无水AlCl3，加入蒸馏水溶解并定容至100mL
6.395%甲醇溶液：量取95mL无水甲醇，向其中加入5mL水，混合均匀
6.4二氢杨梅素（上海阿拉丁生化科技股份有限公司）：纯度≥99.0%（HPLC法），4℃密封避光保存
6.5二氢杨梅素标准品储备液：称取二氢杨梅素标准品15.00mg，加入95%甲醇溶解并定容至25mL
7 操作方法7.1供试样品的制备参照GB/T8303中6.2规定的方法，称取100g左右的显齿蛇葡萄代用茶产品，粉碎成0.85mm（20目）左右的茶粉，混合均匀，每个样品准备三个平行样
7.2测定步骤7.2.1标准曲线的制作分别吸取0.00mL、0.05mL、0.10mL、0.15mL、0.20mL、0.25mL和0.30mL二氢杨梅素标准品储备液置于10mL容量瓶中，加入5%AlCl3溶液3mL，95%甲醇定容至10mL，摇匀后室温避光放置40min，95%甲醇溶液随行空白（即3mL5%AlCl3溶液+7mL95%甲醇），于291nm处测定吸光度
所测吸光度与对应的二氢杨梅素浓度绘制成标准工作曲线（如图1所示）
7.2.2试样母液的制备从7.1中制备的莓茶茶粉中，称取三份样品，每份1.0g，加入100mL95%甲醇，于80℃加热回流提取1h（从甲醇沸腾开始计算时间），得醇提取液，冷却后过滤，将滤液移至100mL容量瓶中，并用95%甲醇溶液定容至100mL
7.2.3试样工作液的制备吸取试样母液2.0mL置于50mL容量瓶中，用95%甲醇定容
7.2.4测定吸取0.5mL试样工作液于10mL容量瓶中，加入3mL5%AlCl3溶液后，用95%甲醇定容至10mL，摇匀，室温避光放置40min，试剂空白液（3mLAlCl3溶液+7mL95%甲醇）作参比，于291nm处测定吸光度
8 结果计算8.1计算方法按照本文件7.2.1的方法制作标准曲线并得到标准曲线方程后，将测定样品的吸光值（Y）代入标准曲线方程中，计算稀释后样品母液中总黄酮的含量（以二氢杨梅素计）/（mg/mL），最终乘以样品稀释倍数50000倍，得到待测定样品中总黄酮含量（以二氢杨梅素计）/（mg/g）
8.2重复性在重复条件下同一样品获得的测定结果的绝对值差值不得超过算术平均值的10%
《 DB34/T 2743-2016 槐米及其制品中总黄酮含量的测定 分光光度法 》标准简介
- 标准名称：槐米及其制品中总黄酮含量的测定 分光光度法
- 标准号：DB34/T 2743-2016
- 中国标准分类号：X00
- 发布日期：2016-12-30
- 国际标准分类号：67.040
- 实施日期：2017-01-30
- 技术归口：安徽省浓香型白酒标准化技术委员会
- 代替标准：
- 主管部门：安徽省质量技术监督局
- 标准分类：食品技术农、林、牧、渔业安徽省食品综合
- 内容简介：
地方标准《槐米及其制品中总黄酮含量的测定 分光光度法》由安徽省浓香型白酒标准化技术委员会归口上报，主管部门为安徽省质量技术监督局。本标准规定了槐米及其制品中总黄酮含量的测定分光光度法。本标准适用于槐米、槐米提取液以及槐米发酵液等样品中总黄酮含量的测定。
《 DB15/T 1074-2016 尖叶胡枝子总黄酮制备与检测 》标准简介
- 标准名称：尖叶胡枝子总黄酮制备与检测
- 标准号：DB15/T 1074-2016
- 中国标准分类号：B38
- 发布日期：2016-11-28
- 国际标准分类号：65.020
- 实施日期：2017-02-28
- 技术归口：
- 代替标准：
- 主管部门：内蒙古自治区质量技术监督局
- 标准分类：农业内蒙古自治区农、林、牧、渔业农业和林业
- 内容简介：
地方标准《尖叶胡枝子总黄酮制备与检测》，主管部门为内蒙古自治区质量技术监督局。
《 DB64/T 1082-2015 枸杞中总黄酮含量的测定分光光度比色法 》标准简介
- 标准名称：枸杞中总黄酮含量的测定分光光度比色法
- 标准号：DB64/T 1082-2015
- 中国标准分类号：B05
- 发布日期：2015-11-22
- 国际标准分类号：65.020
- 实施日期：2015-11-22
- 技术归口：
- 代替标准：
- 主管部门：宁夏回族自治区质量技术监督局
- 标准分类：农业农、林、牧、渔业农业和林业宁夏回族自治区
- 内容简介：
地方标准《枸杞中总黄酮含量的测定-分光光度比色法》，主管部门为宁夏回族自治区质量技术监督局。
《 DB64/T 1139-2015 枸杞中总黄酮含量的测定 高效液相色谱法 》标准简介
- 标准名称：枸杞中总黄酮含量的测定 高效液相色谱法
- 标准号：DB64/T 1139-2015
- 中国标准分类号：B05
- 发布日期：2015-11-30
- 国际标准分类号：65.020
- 实施日期：2015-11-30
- 技术归口：
- 代替标准：
- 主管部门：宁夏回族自治区质量技术监督局
- 标准分类：农业农、林、牧、渔业农业和林业宁夏回族自治区
- 内容简介：
地方标准《枸杞中总黄酮含量的测定 高效液相色谱法》，主管部门为宁夏回族自治区质量技术监督局。
《 SN/T 4592-2016 出口食品中总黄酮的测定 》标准简介
- 标准名称：出口食品中总黄酮的测定
- 标准号：SN/T 4592-2016
- 中国标准分类号：C53
- 发布日期：2016-08-23
- 国际标准分类号：67.180
- 实施日期：2017-03-01
- 技术归口：国家认证认可监督管理委员会
- 代替标准：
- 主管部门：国家质量监督检验检疫总局
- 标准分类：食品技术食品试验和分析的一般方法制造业SN 出入境检验检疫
- 内容简介：
行业标准《出口食品中总黄酮的测定》由国家认证认可监督管理委员会归口上报，主管部门为国家质量监督检验检疫总局。本标准规定了出境食品中黄酮类化合物总量的分光光度法检测方法。本标准适用于出境枸杞、茶叶、葡萄酒等植物源性食品中黄酮类化合物的测定。
《 NY/T 2010-2011 柑桔类水果及制品中总黄酮含量的测定 》标准简介
- 标准名称：柑桔类水果及制品中总黄酮含量的测定
- 标准号：NY/T 2010-2011
- 中国标准分类号：B31
- 发布日期：2011-09-01
- 国际标准分类号：67.080
- 实施日期：2011-12-01
- 技术归口：中华人民共和国农业部
- 代替标准：
- 主管部门：农业农村部
- 标准分类：食品技术水果、蔬菜及其制品水果及其制品农、林、牧、渔业NY 农业
- 内容简介：
行业标准《柑桔类水果及制品中总黄酮含量的测定》，主管部门为农业农村部。本标准规定了柑橘类水果及制品中总黄酮含量的比色检测法。本标准适用于柑橘类水果及制品中总黄酮含量的测定。本标准总黄酮的定量测定范围：0.8mg/L～100mg/L.本标准总黄酮的定量限：0.8mg/kg。本标准总黄酮的检出限：0.3mg/kg。
《 NY/T 1295-2007 荞麦及其制品中总黄酮含量的测定 》标准简介
- 标准名称：荞麦及其制品中总黄酮含量的测定
- 标准号：NY/T 1295-2007
- 中国标准分类号：B20
- 发布日期：2007-04-17
- 国际标准分类号：65.020
- 实施日期：2007-07-01
- 技术归口：
- 代替标准：
- 主管部门：农业农村部
- 标准分类：农业农业和林业农业和林业综合农、林、牧、渔业NY 农业
- 内容简介：
行业标准《荞麦及其制品中总黄酮含量的测定》，主管部门为农业农村部。本标准规定了荞麦及其制品中总黄酮含量的分光光度测定法。本标准适用于荞麦及荞麦制品中总黄酮含量的测定，其最低检出限为0.5mg。
《 GB/T 20574-2006 蜂胶中总黄酮含量的测定方法 分光光度比色法 》标准简介
- 标准名称：蜂胶中总黄酮含量的测定方法 分光光度比色法
- 标准号：GB/T 20574-2006
- 中国标准分类号：B40
- 发布日期：2006-09-14
- 国际标准分类号：65.020.01
- 实施日期：2007-01-01
- 技术归口：中华全国供销合作总社
- 代替标准：
- 主管部门：中华全国供销合作总社
- 标准分类：农业农业和林业农业和林业综合
- 内容简介：
国家标准《蜂胶中总黄酮含量的测定方法 分光光度比色法》由442（中华全国供销合作总社）归口，主管部门为中华全国供销合作总社。
本标准规定了蜂胶中黄酮类化合物的总含量测定方法。 本标准适用于蜂胶，包括原始蜂胶、精制蜂胶及蜂胶的乙醇溶液。 本标准可用于测定黄酮类化合物的总含量在0.1%以上的蜂胶。
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结语
**总黄酮检测**对于确保食品、中药及相关产品的质量具有重要意义。通过科学合理的检测方法，可以精确测定总黄酮含量，确保产品符合相关标准和规范。随着检测技术的不断发展，未来的检测方法将更加精准、高效，为行业提供更可靠的质量控制手段。
结语
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