本文件规定了牛呼吸道合胞体病毒病竞争性酶联免疫吸附试验抗体检测的术语和定义、竞争性酶联免疫吸附试验本文件适用于牛呼吸道合胞体病毒病竞争性酶联免疫吸附试验抗体检测3　术语和定义下列术语和定义适用于本文件

牛呼吸道合胞体病毒Bovinerespiratorysyncytialvirus,BRSV牛呼吸道合胞体病毒是单股负链RNA病毒，属副粘病毒科、肺病毒属

感染奶牛和肉牛后可引起急性呼吸道疾病综合征

3.2竞争性酶联免疫吸附试验Competitiveenzymelinkedimmunosorbentassay,cELISA竞争性ELISA法是将已知的特异性抗原包被在固相载体上，加入待测样本和酶结合物，其中的相应抗体即可与载体上的抗原和酶结合物竞争结合，洗去未结合的材料和被竞争结合的酶结合物，加入酶的底物，由呈色反应来测定抗体

4　竞争性酶联免疫吸附试验试验准备实验环境、仪器与设备、洗液的制备、稀释液的制备、示踪剂工作液的配制按照试剂盒说明书规定执行

稀释用蒸馏水应符合GB/T6682的要求

检测样品无菌采集牛静脉血2mL～3mL,自然凝固1h～2h，1500rpm/min~2000rpm/min离心5min，收集血清于1.5mL离心管中

操作程序使用前将所有试剂（结合物除外）恢复至室温（20℃～25℃），轻轻摇动或旋转，使试剂混合均匀

4.3.1　取板取出微孔板，并在操作记录表上标记样品的位置

如果使用微孔板的一部分，则只需取出足够检测样品的条数

未使用的微孔板条用锡箔纸包好，保持干燥与密封，2℃～8℃保存

4.3.2　加样按照试剂盒说明书规定浓度，稀释血清样品，每孔加入待检样品，按照板孔布局加阴性和阳性对照

4.3.3　稀释酶结合物用稀释液将酶结合物稀释至所需要的量

4.3.4　加酶结合物每孔加入酶结合物，摇匀

4.3.5　感作将微孔板密封后，37oC孵育

4.3.6　洗板弃去微孔板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔6次

在每一次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在洗涤时以及在加入下一步试剂之前要防止反应板出现干燥现象，避免孔内产生气泡，在最后一次甩掉后，在吸水材料上用力扣板，吸去剩余的液体.4.3.7　加底物每孔加入底物溶液

避光室温孵育

4.3.8　加终止液每孔加入终止液终止反应

4.3.9　测定吸光值（OD值）酶标仪预热15min，在加入终止液5min内读取波长的吸光度值

实验有效性检测只有当满足试剂盒说明书规定的条件时检测才有效

结果计算使用试剂盒说明书指定的计算公式进行结果计算

结果判定使用试剂盒说明书规定的判定标准进行结果判定

本文件规定了牛冠状病毒夹心法酶联免疫吸附试验抗原检测的术语和定义、夹心法酶联免疫吸附试验本文件适用于宁夏养牛场牛冠状病毒夹心法酶联免疫吸附试验抗原检测3　术语和定义下列术语和定义适用于本文件

牛冠状病毒Bovinecoronavirus,BCV牛冠状病毒属于冠状病毒科，是引起新生犊牛腹泻、成年牛呼吸道感染的重要病原

　夹心法酶联免疫吸附试验Sandwichenzymelinkedimmunosorbentassay,sELISA夹心ELISA法是将已知的特异性抗体包被在固相载体上，加入待测样本和针对该抗原的酶标抗体，其中的相应抗原即可与载体上的抗体和酶标抗体特异结合，洗去未结合的材料和酶标抗体，加入酶的底物，由呈色反应来测定抗原

4　夹心法酶联免疫吸附试验试验准备实验环境、仪器与设备、洗液的制备、稀释液的制备、示踪剂工作液的配制按照试剂盒说明书规定执行

实验环境的生物安全条件应符合GB/T19489的要求，稀释用蒸馏水应符合GB/T6682的要求

检测样品采集牛粪便样品加入等体积的样品稀释液，自然沉淀10min，无需离心，吸取粪便溶液的上清液于1.5mL离心管中

操作程序使用前将所有试剂恢复至18℃～24℃，轻轻摇动或旋转，使试剂混合均匀

4.3.1　取板取出微孔板，并在操作记录表上标记样品的位置

如果使用微孔板的一部分，则只需取出足够检测样品的条数

未使用的微孔板条用锡箔纸包好，保持干燥与密封，2℃～8℃保存

4.3.2　加样每孔加样品，A1与B1孔中加入样本1，C1和D1孔中加入样本2，以此类推

同样方法加入阳性对照（例如G1和H1）

4.3.3　感作将微孔板封板后，按照试剂盒说明书中指定的时间进行室温孵育

4.3.4　洗涤弃去微孔板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次

在每一次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在洗涤时以及在加入下一步试剂之前要防止反应板出现干燥现象，避免孔内产生气泡，在最后一次甩掉后，在吸水材料上用力扣板，吸去剩余的液体.4.3.5　加酶结合物每孔加入酶结合物，摇匀

密封后按照试剂盒说明书中指定的时间进行室温孵育，按步骤4.3.4的步骤进行洗涤

4.3.6　加底物每孔加入底物溶液

加入孔中的底物溶液必须完全无色

按照试剂盒说明书中指定的时间进行室温避光孵育

4.3.7　加终止液每孔加入终止液终止反应

4.3.8　测定吸光值（OD值）酶标仪预热15min，在加入终止液5min内读取试剂盒说明书中指定波长的吸光度值（OD）

实验有效性检测只有当满足试剂盒说明书规定的条件时检测才有效

结果计算使用试剂盒说明书指定的计算公式进行结果计算

结果判定使用试剂盒说明书规定的判定标准进行结果判定

本文件规定了牛4型疱疹病毒间接酶联免疫吸附试验抗体检测的术语和定义、间接酶联免疫吸附试验本文件适用于牛血清、牛血浆、牛奶样本中牛4型疱疹病毒病抗体的检测，可用于该病的实验室检测、诊断和流行病学调查3　术语和定义下列术语和定义适用于本文件

牛4型疱疹病毒Bovineherpesvirus4，BoHV-4牛4型疱疹病毒属于疱疹病毒科丙型疱疹病毒亚科猴病毒属，是导致牛生殖障碍的主要病毒之一

间接酶联免疫吸附试验Indirectenzymelinkedimmunosorbentassay,iELISA间接ELISA方法是先将抗原结合到ELISA板上，随后分两步进行检测，首先加入检测抗体与抗原特异性结合，随后加入酶标二抗检测并利用底物显色,由呈色反应来测定抗原

4　间接酶联免疫吸附试验操作试验准备实验环境、仪器与设备、洗液的制备、稀释液的制备、示踪剂工作液的配制按照试剂盒说明书规定执行

实验环境的生物安全条件应符合GB/T19489的要求，稀释用蒸馏水应符合GB/T6682的要求

检测样品新鲜或冷冻的血清、血浆、奶样均可直接用于检测

奶样准备：4000rpm/min离心20min，利用巴斯德吸管吸取中间层液体，注意不要接触到下层的细胞沉淀物

未稀释的脱脂奶可直接加入微孔板

操作程序使用前将所有试剂恢复至21℃±3℃，轻轻摇动或旋转，使试剂混合均匀

4.3.1　准备取出微孔板，并在操作记录表上标记样品的位置

如果使用微孔板的一部分，则只需取出足够检测样品的条数

未使用的微孔板条用锡箔纸包好，保持干燥与密封，2℃～8℃保存

4.3.2　血清或血浆稀释血清或血浆按试剂盒要求稀释，避免使用溶血样品和具有凝结物的样品

在试剂盒的微孔板中按要求加入样品、稀释液，吹打混匀

4.3.3　对照样品（阳性血清和阴性血清）和示踪剂稀释阳性血清、阴性血清及示踪剂应用稀释液按试剂盒要求进行稀释

4.3.4　加样每孔加入样品（血清、血浆或奶样），一孔一样

阳性血清加入A1孔，阴性血清加入A2孔，示踪剂加入A3孔，样品1加入A4孔，以此类推

4.3.5　感作将微孔板封板后，按照试剂盒说明书中指定的时间进行室温孵育

4.3.6　洗涤弃去微孔板中液体，用300μL左右的洗涤液洗涤每个板孔3次

在每一次洗涤后，甩去每个板孔中的液体，在洗涤时以及在加入下一步试剂之前要防止反应板出现干燥现象，避免孔内产生气泡，在最后一次甩掉后，在吸水材料上用力扣板，吸去剩余的液体

4.3.7　稀释酶结合物将酶结合物用稀释液按要求进行稀释

4.3.8　加酶结合物每孔加入酶结合物，摇匀

将微孔板封板后，按照试剂盒说明书中指定的时间进行室温孵育，按步骤4.3.6进行洗涤

4.3.9　加底物每孔加入底物溶液

按照试剂盒说明书中指定的时间进行室温孵育

4.3.10　加终止液每孔加终止液终止反应

4.3.11　测定吸光值（OD值）酶标仪预热15min，在加入终止液5min内读取试剂盒说明书中指定波长的吸光度值

实验有效性检测只有当满足试剂盒说明书规定的条件时检测才有效

结果计算使用试剂盒说明书指定的计算公式进行结果计算

结果判定使用试剂盒说明书规定的判定标准进行结果判定

本文件规定了新型冠状病毒（SARS-CoV-2）动物血清抗体双抗原夹心酶联免疫吸附试验检测方法，包括技术原理、试剂与材料、仪器与设备、样品的采集与运输、检测操作步骤、结果判定和生物安全要求等

本文件适用于家畜、家禽、经济动物、野生动物、实验动物、宠物等动物血清中新型冠状病毒抗体的筛查检测

地方标准《布鲁氏菌病竞争酶联免疫吸附试验诊断技术》，主管部门为山东省质量技术监督局。

地方标准《鸭坦布苏病毒抗体间接酶联免疫吸附试验（ELISA）方法》，主管部门为山东省质量技术监督局。

地方标准《牛结核病γ干扰素酶联免疫吸附试验》由山东省畜牧业正规标准化技术委员会归口上报，主管部门为山东省质量技术监督局。本标准规定了牛结核病γ干扰素ELISA诊断技术的术语和定义、试剂及仪器、检测方法、结果判定和操作注意事项等。本标准所规定的技术适用于牛感染结核分枝杆菌或牛分枝杆菌时γ干扰素的检测。

地方标准《牛轮状病毒抗体竞争性酶联免疫吸附试验操作规程》，主管部门为宁夏回族自治区市场监督管理厅。

地方标准《口蹄疫病毒非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验检测方法》，主管部门为湖北省质量技术监督局。

地方标准《猪流感病毒（H1亚型）酶联免疫吸附试验抗体检测方法》，主管部门为湖北省质量技术监督局。

行业标准《煤的等温吸附试验中平衡水分的测定方法》由全国煤炭标准化技术委员会归口上报，主管部门为国家矿山安全监察局。本标准规定了煤的等温吸附试验中平衡水分的测定方法。本标准适用于对褐煤、烟煤和无烟煤进行等温吸附试验时平衡水分的测定。

行业标准《牛副结核病酶联免疫吸附试验操作规程》由国家认证认可监督管理委员会归口上报，主管部门为国家质量监督检验检疫总局。本标准规定了牛副结核病酶联免疫吸附试验检验方法。本标准适用于牛副结核病抗体的检测。

行业标准《猪流行性腹泻间接斑点酶联免疫吸附试验操作规程》由国家认证认可监督管理委员会归口上报，主管部门为国家质量监督检验检疫总局。SN/T1699的本部分规定了猪流行性腹泻间接斑点酶联免疫吸附试验检测方法。本部分适用于猪流行性腹泻病毒抗体的检测。一颗用于本病的检疫、疫情监测和流行病学调查。

行业标准《非洲猪瘟病毒红血球吸附试验操作规程》由国家认证认可监督管理委员会归口上报，主管部门为国家质量监督检验检疫总局。本标准规定了红血球吸附试验检测非洲猪瘟病毒的方法。本标准适用于检测组织或外周血中的非洲猪瘟病毒。

行业标准《鸡传染性法氏囊病酶联免疫吸附试验操作规程》由国家认证认可监督管理委员会归口上报，主管部门为国家质量监督检验检疫总局。本标准规定了鸡传染性法氏囊病酶联免疫吸附试验操作方法。本标准适用于鸡传染性法氏囊病病毒抗体的检测。