荧光定量PCR检测:科学精准的基因分析技术
概括
荧光定量PCR(qPCR)是一种高灵敏度的分子生物学检测技术,广泛应用于医学诊断、食品安全检测、环境监测等领域。该技术基于聚合酶链式反应(PCR),结合荧光信号实时监测扩增过程,实现精确定量目标核酸序列。本文将介绍荧光定量PCR的检测样品、检测项目、检测仪器及检测方法,以帮助读者更全面地了解这一技术。
检测样品
荧光定量PCR可适用于多种生物样品,包括:
- 血液与组织样本:用于病原体检测、遗传病筛查等。
- 唾液与口腔拭子:便捷采样方式,广泛用于病毒检测。
- 食品与环境样品:可用于检测食品中的微生物污染或环境中的致病因子。
- 细胞与培养液:用于基因表达分析或生物制药研究。
不同类型的样品在前处理过程中可能有所不同,以确保提取的核酸质量满足qPCR检测要求。
检测项目
荧光定量PCR可检测多种目标核酸序列,主要包括:
- 病原体核酸检测:包括病毒、细菌、真菌等微生物。
- 基因突变筛查:用于遗传疾病、癌症等领域的精准诊断。
- 基因表达分析:研究特定基因在不同条件下的表达水平。
- 食品安全检测:检测转基因成分、食源性致病菌等。
不同检测项目采用不同的引物和探针设计,以保证检测结果的特异性和灵敏度。
检测仪器
荧光定量PCR检测需使用正规仪器,包括:
- 荧光定量PCR仪:核心设备,可实时监测扩增过程中的荧光信号变化。
- 核酸提取仪:提高核酸提取的效率与纯度,确保后续PCR反应的成功率。
- 移液器与PCR板:用于精确分装样品,确保实验重复性。
- 数据分析软件:用于解析扩增曲线并计算目标基因的拷贝数。
合适的仪器配置和严格的实验操作是确保荧光定量PCR检测可靠性的关键。
检测方法
荧光定量PCR的检测方法主要包括以下步骤:
- 样品制备:从待测样品中提取DNA或RNA,并进行反转录(RT-PCR)以获取cDNA(仅适用于RNA样品)。
- PCR反应体系构建:加入特异性引物、荧光探针、DNA聚合酶及缓冲体系,混合均匀后分装至PCR反应孔中。
- 荧光定量PCR扩增:在PCR仪上进行循环扩增,同时实时监测荧光信号变化。
- 数据分析:通过荧光信号强度计算目标基因的起始拷贝数,并与标准曲线对比定量分析。
该方法具备高通量、高特异性、实时监测等优势,适用于多种应用场景。
检测标准(部分)
《 DB36/T 1904-2023 实验动物 支原体荧光定量PCR检测方法 》标准简介
- 标准名称:实验动物 支原体荧光定量PCR检测方法
- 标准号:DB36/T 1904-2023
- 中国标准分类号:B44
- 发布日期:2023-12-11
- 国际标准分类号:65.020.30
- 实施日期:2024-06-01
- 技术归口:江西省卫生健康委员会
- 代替标准:
- 主管部门:江西省市场监督管理局
- 标准分类:农业动物饲养和繁殖科学研究和技术服务业江西省
- 内容简介:
地方标准《实验动物 支原体荧光定量PCR检测方法》由省卫生健康委员会归口上报,主管部门为江西省市场监督管理局。本文件规定了实验动物支原体荧光定量PCR检测的术语和定义、缩略语、设备和材料、试剂、检测流程和结果判定等内容。本文件适用于小鼠、大鼠中支原体的检测,饲养环境中支原体的检测参照执行。
《 DB36/T 1903-2023 实验动物 小鼠肝炎病毒荧光定量PCR检测方法 》标准简介
- 标准名称:实验动物 小鼠肝炎病毒荧光定量PCR检测方法
- 标准号:DB36/T 1903-2023
- 中国标准分类号:B44
- 发布日期:2023-12-11
- 国际标准分类号:65.020.30
- 实施日期:2024-06-01
- 技术归口:江西省卫生健康委员会
- 代替标准:
- 主管部门:江西省市场监督管理局
- 标准分类:农业动物饲养和繁殖科学研究和技术服务业江西省
- 内容简介:
地方标准《实验动物 小鼠肝炎病毒荧光定量PCR检测方法》由省卫生健康委员会归口上报,主管部门为江西省市场监督管理局。本文件规定了实验动物小鼠肝炎病毒荧光定量PCR检测的术语和定义、缩略语、设备和材料、试剂、检测流程和结果判定等内容。本文件适用于小鼠肝炎病毒的检测,饲养环境中小鼠肝炎病毒的检测参照执行。
《 DB36/T 1902-2023 实验动物 嗜肺巴斯德杆菌荧光定量PCR检测方法 》标准简介
- 标准名称:实验动物 嗜肺巴斯德杆菌荧光定量PCR检测方法
- 标准号:DB36/T 1902-2023
- 中国标准分类号:B44
- 发布日期:2023-12-11
- 国际标准分类号:65.020.30
- 实施日期:2024-06-01
- 技术归口:江西省卫生健康委员会
- 代替标准:
- 主管部门:江西省市场监督管理局
- 标准分类:农业动物饲养和繁殖科学研究和技术服务业江西省
- 内容简介:
地方标准《实验动物 嗜肺巴斯德杆菌荧光定量PCR检测方法》由省卫生健康委员会归口上报,主管部门为江西省市场监督管理局。本文件规定了实验动物嗜肺巴斯德杆菌荧光定量PCR检测的术语和定义、缩略语、设备和材料、试剂、检测流程和结果判定等内容。本文件适用于小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、兔中嗜肺巴斯德杆菌的检测,饲养环境中嗜肺巴斯德杆菌的检测参照执行。
《 T/CAOE T/CAOE75-2024 牡蛎徐氏拟裸茎吸虫荧光定量PCR检测方法 》标准简介
- 标准名称:牡蛎徐氏拟裸茎吸虫荧光定量PCR检测方法
- 标准号:T/CAOE T/CAOE75-2024
- 中国标准分类号:A041
- 发布日期:2024-02-04
- 国际标准分类号:65.020.30
- 实施日期:2024-02-04
- 团体名称:中国海洋工程咨询协会
- 标准分类:农业A 农、林、牧、渔业
- 内容简介:
规定了太平洋牡蛎中寄生徐氏拟裸茎吸虫(GymnophalloidesseoiLee)的实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测方法,给出了实时荧光PCR法所需的试剂、仪器与设备、样品、检测方法和条件、结果处理及结果判定等。
《 DB65/T 4669-2023 小反刍兽疫病毒与羊传染性脓疱病毒双重实时荧光定量PCR检测方法 》标准简介
- 标准名称:小反刍兽疫病毒与羊传染性脓疱病毒双重实时荧光定量PCR检测方法
- 标准号:DB65/T 4669-2023
- 中国标准分类号:B41
- 发布日期:2023-07-14
- 国际标准分类号:65.020
- 实施日期:2023-09-20
- 技术归口:新疆维吾尔自治区畜牧兽医局
- 代替标准:
- 主管部门:新疆维吾尔自治区市场监督管理局
- 标准分类:农业动物饲养和繁殖农、林、牧、渔业新疆维吾尔自治区
- 内容简介:
地方标准《小反刍兽疫病毒与羊传染性脓疱病毒双重实时荧光定量PCR检测方法》由新疆维吾尔自治区畜牧兽医局归口上报,主管部门为新疆维吾尔自治区市场监督管理局。本文件规定了小反刍兽疫病毒与羊传染性脓疱病毒双重实时荧光定量PC检测方法的试剂和引物、仪器用具与耗材、实验步骤、检测结果的判定。本文件适用于新疆小反刍兽疫病毒与羊传染性脓疱病毒的核酸检测。
《 T/CVMA 42-2020 猫疱疹病毒荧光定量PCR检测方法 》标准简介
- 标准名称:猫疱疹病毒荧光定量PCR检测方法
- 标准号:T/CVMA 42-2020
- 中国标准分类号:M733
- 发布日期:2020-12-22
- 国际标准分类号:11.220
- 实施日期:2020-12-22
- 团体名称:中国兽医协会
- 标准分类:M 科学研究和技术服务业医药卫生技术
- 内容简介:
本文件规定了猫疱疹病毒(FHV)荧光定量PCR检测方法的材料、耗材与器械、试剂、引物、操作步骤和结果判定等方法
本文件适用于猫的疱疹病毒的实验室检测
《 DB64/T1902-2023 实验动物 嗜肺巴斯德杆菌荧光定量PCR检测方法 》标准简介
- 标准名称:实验动物 嗜肺巴斯德杆菌荧光定量PCR检测方法
- 标准号:DB64/T1902-2023
- 中国标准分类号:B44
- 发布日期:2023-03-24
- 国际标准分类号:
- 实施日期:2023-06-24
- 技术归口:省卫生健康委员会
- 代替标准:
- 主管部门:宁夏回族自治区市场监督管理厅
- 标准分类:科学研究和技术服务业宁夏回族自治区
- 内容简介:
地方标准《实验动物 嗜肺巴斯德杆菌荧光定量PCR检测方法》由省卫生健康委员会归口上报,主管部门为江西省市场监督管理局。
《 DB64/T1903-2023 实验动物 小鼠肝炎病毒荧光定量PCR检测方法 》标准简介
- 标准名称:实验动物 小鼠肝炎病毒荧光定量PCR检测方法
- 标准号:DB64/T1903-2023
- 中国标准分类号:B44
- 发布日期:2023-03-24
- 国际标准分类号:
- 实施日期:2023-06-24
- 技术归口:省卫生健康委员会
- 代替标准:
- 主管部门:宁夏回族自治区市场监督管理厅
- 标准分类:科学研究和技术服务业宁夏回族自治区
- 内容简介:
地方标准《实验动物 小鼠肝炎病毒荧光定量PCR检测方法》由省卫生健康委员会归口上报,主管部门为江西省市场监督管理局。
《 DB64/T1904-2023 实验动物 支原体荧光定量PCR检测方法 》标准简介
- 标准名称:实验动物 支原体荧光定量PCR检测方法
- 标准号:DB64/T1904-2023
- 中国标准分类号:B44
- 发布日期:2023-03-24
- 国际标准分类号:
- 实施日期:2023-06-24
- 技术归口:省卫生健康委员会
- 代替标准:
- 主管部门:宁夏回族自治区市场监督管理厅
- 标准分类:科学研究和技术服务业宁夏回族自治区
- 内容简介:
地方标准《实验动物 支原体荧光定量PCR检测方法》由省卫生健康委员会归口上报,主管部门为江西省市场监督管理局。
《 DB62/T 4669-2023 小反刍兽疫病毒与羊传染性脓疱病毒双重实时荧光定量PCR检测方法 》标准简介
- 标准名称:小反刍兽疫病毒与羊传染性脓疱病毒双重实时荧光定量PCR检测方法
- 标准号:DB62/T 4669-2023
- 中国标准分类号:B41
- 发布日期:2023-03-28
- 国际标准分类号:07.080
- 实施日期:2023-05-01
- 技术归口:新疆维吾尔自治区畜牧兽医局
- 代替标准:
- 主管部门:甘肃省市场监督管理局
- 标准分类:数学、自然科学农、林、牧、渔业生物学、植物学、动物学甘肃省
- 内容简介:
地方标准《小反刍兽疫病毒与羊传染性脓疱病毒双重实时荧光定量PCR检测方法》由新疆维吾尔自治区畜牧兽医局归口上报,主管部门为新疆维吾尔自治区市场监督管理局。本文件规定了陇东苜蓿的品种来源、植物学特征、生物学特性、经济性状、品质性状和栽培技术要点。本文件适用于陇东苜蓿品种鉴别及推广。
《 DB41/T 1516-2017 犬瘟热、犬细小病毒二重TaqMan MGB荧光定量PCR检测方法 》标准简介
- 标准名称:犬瘟热、犬细小病毒二重TaqMan MGB荧光定量PCR检测方法
- 标准号:DB41/T 1516-2017
- 中国标准分类号:B41
- 发布日期:2017-12-06
- 国际标准分类号:65.020.30
- 实施日期:2018-03-06
- 技术归口:
- 代替标准:
- 主管部门:河南省市场监督管理局
- 标准分类:农业农、林、牧、渔业河南省
- 内容简介:
地方标准《犬瘟热、犬细小病毒二重TaqMan MGB荧光定量PCR检测方法》,主管部门为河南省市场监督管理局。
《 DB50/T 1254-2022 山羊地方性鼻内肿瘤病毒EvaGreen荧光定量PCR检测方法 》标准简介
- 标准名称:山羊地方性鼻内肿瘤病毒EvaGreen荧光定量PCR检测方法
- 标准号:DB50/T 1254-2022
- 中国标准分类号:B41
- 发布日期:2022-06-01
- 国际标准分类号:11.220
- 实施日期:2022-09-01
- 技术归口:重庆市农业农村委员会提
- 代替标准:
- 主管部门:重庆市市场监督管理局
- 标准分类:医药卫生技术农、林、牧、渔业重庆市农业和林业
- 内容简介:
地方标准《山羊地方性鼻内肿瘤病毒EvaGreen荧光定量PCR检测方法》由重庆市农业农村委员会提归口上报,主管部门为重庆市市场监督管理局。本文件规定了山羊地方性鼻内肿瘤病毒EvaGreen荧光定量PCR检测方法的缩略语、原理、试剂和耗材、仪器和设备、样品采集、运输与保存、操作步骤、结果判定、实验室生物安全要求等内容。本文件适用于山羊地方性鼻内肿瘤病毒核酸的检测。
《 DB33/T 2269-2020 猪圆环病毒2型与3型双重荧光定量PCR检测方法 》标准简介
- 标准名称:猪圆环病毒2型与3型双重荧光定量PCR检测方法
- 标准号:DB33/T 2269-2020
- 中国标准分类号:B41
- 发布日期:2020-06-30
- 国际标准分类号:11.220
- 实施日期:2020-07-30
- 技术归口:
- 代替标准:
- 主管部门:浙江省市场监督管理局
- 标准分类:医药卫生技术农、林、牧、渔业浙江省兽医学
- 内容简介:
地方标准《猪圆环病毒2型与3型双重荧光定量PCR检测方法》,主管部门为浙江省市场监督管理局。
《 DB37/T 4053-2020 新城疫病毒基因VII型荧光定量PCR检测方法 》标准简介
- 标准名称:新城疫病毒基因VII型荧光定量PCR检测方法
- 标准号:DB37/T 4053-2020
- 中国标准分类号:B41
- 发布日期:2020-07-09
- 国际标准分类号:11.220
- 实施日期:2020-08-09
- 技术归口:
- 代替标准:
- 主管部门:山东省市场监督管理局
- 标准分类:医药卫生技术农、林、牧、渔业山东省兽医学
- 内容简介:
地方标准《新城疫病毒基因VII型荧光定量PCR检测方法》,主管部门为山东省市场监督管理局。
《 DB37/T 4044-2020 禽腺病毒4型荧光定量PCR检测方法 》标准简介
- 标准名称:禽腺病毒4型荧光定量PCR检测方法
- 标准号:DB37/T 4044-2020
- 中国标准分类号:B41
- 发布日期:2020-07-09
- 国际标准分类号:11.220
- 实施日期:2020-08-09
- 技术归口:
- 代替标准:
- 主管部门:山东省市场监督管理局
- 标准分类:医药卫生技术农、林、牧、渔业山东省兽医学
- 内容简介:
地方标准《禽腺病毒4型荧光定量PCR检测方法》,主管部门为山东省市场监督管理局。
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结语
荧光定量PCR是一种高精度、高灵敏度的核酸检测技术,广泛应用于医学、生物研究、食品安全等领域。合理选择检测样品、优化实验流程,并使用合适的检测仪器和方法,可确保实验结果的可靠性。未来,随着技术的不断发展,荧光定量PCR将在更多领域发挥重要作用,为科学研究和公共健康提供强有力的技术支持。
结语
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